全光譜流式細胞儀是一種先進的流式細胞分析技術,它相較于傳統流式細胞儀具有一些顯著的優勢,但也存在一些局限性。
一、優點:
1.更多的檢測通道:光譜流式細胞儀可以提供多達38個或更多的熒光檢測通道,這遠遠超過了傳統流式細胞儀的通道數。
2.光譜靈活性:由于能夠檢測400-900nm全范圍光譜,這種儀器可以檢測任何能被配置激光器激發的熒光染料,無需更換濾光片,提供了無限的靈活性。
3.高光譜分辨率:光譜流式細胞儀能夠解析和補償調節分離高度重疊的熒光團,即使在光譜重疊度很高的兩種熒光染料也可以同時使用。
4.擴展性強:可以通過增加激光器數量來進一步擴展檢測通道,例如,配備5根激光器可以實現64個熒光檢測通道。
二、缺點:
1.成本較高:由于其復雜的光學系統和數據處理需求,光譜流式細胞儀的成本通常高于傳統流式細胞儀。
2.操作復雜:相比于傳統流式細胞儀,光譜流式細胞儀的操作和維護可能更為復雜,需要專業的技術人員進行操作和管理。
3.數據分析難度:由于數據量的大幅增加,流式細胞儀產生的數據分析和解釋可能需要更高級的計算工具和專業知識。
全光譜流式細胞儀與傳統流式之間的區別:
傳統流式和光譜流式之間的第一個重要區別是色散。傳統流式是根據波長來阻擋、反射或傳輸光子的,而光譜流式是根據波長來色散光子的。最常見的色散光學元件是棱鏡和光柵。棱鏡是一種典型的色散光學元件,它根據波長的不同來折射光線。棱鏡的通量通常很高(>90%),色散發生在寬波長范圍內,但色散是非線性的,光譜分辨率隨著波長的變化而變化,通常在可見光譜中變化幾納米。光柵在特定波長下具有更高分辨率的線性色散,但高階衍射的存在會降低效率和通量,增加雜散光。體積相位全息光柵,在他們的最佳波長,也可以提高效率和分辨率,而且雜散光的強度較低。除了色散問題,其他光學效應,如球面像差,也會影響性能。大多數商用攝譜儀的設計都是為了最小化這些問題,以提供最大的光學性能。
傳統流式和光譜流式的第二個主要區別是檢測器。棱鏡或光柵產生的連續光譜的測量需要一個線性陣列的檢測器。檢測陣列的密度和間距,以及色散光學的性能,共同決定分辨率。近年來,檢測技術發展迅速,目前光流式的檢測器主要有CCD和多陽極PMT。